Reinigungsausrüstung für die Oligo-Reinigung

1. Gelelektrophorese-Chromatographie-Reinigung
Verwenden Sie zur Reinigung denaturierende Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Chromatographie.Das Denaturierungsmittel ist im Allgemeinen 4 M Formamid oder 7 M Harnstoff, die Konzentration an Acrylamid liegt zwischen 5 und 15 % und der Anteil an Methacrylamid liegt hauptsächlich zwischen 2 und 10 %.
Nach der Elektrophorese muss die Position der Nukleinsäurebande unter Bestrahlung mit ultraviolettem Licht bestimmt werden, das Gel mit der Zielnukleinsäure wird abgeschnitten, die Nukleinsäure wird zerkleinert und ausgelaugt, und dann wird die Auslaugungslösung konzentriert, entsalzt, quantifiziert und lyophilisiert.

2. DMT-On, HPLC-Reinigung
Wählen Sie während der Synthese den DMT-On-Modus. Das Rohprodukt wurde zentrifugiert und bei Raumtemperatur konzentriert, um überschüssiges Ammoniak nach der Aminolyse zu entfernen.
Die Trennung wurde unter Verwendung einer C18-Säule mit Acetonitril und 10 % Triethylamin-Essigsäure (TEAA) als Elutionsmittel durchgeführt.Nach Abschluss der Elution wird konzentriert und anschließend die DMT-Gruppe mit Trifluoressigsäure entfernt.Nach der Neutralisation werden einige Salze und kleine Moleküle durch ein Absperrrohr entfernt und schließlich entsalzt.

Mit dieser Methode kann ein Produkt mit höherer Reinheit erhalten werden, es muss jedoch auf das Auftreten einer Depurinierung geachtet werden.

3. DMT-Off, HPLC-Reinigung
Wählen Sie während der Synthese DMT-Off und das Rohprodukt wurde zentrifugiert und bei Raumtemperatur konzentriert, um überschüssiges Ammoniak nach der Ammonolyse zu entfernen.
Die Trennung erfolgte unter Verwendung einer C18-Säule mit Acetonitril und 10 % Triethylaminessigsäure in Wasser als Elutionsmittel.Nachdem die Trennung abgeschlossen und quantifiziert ist, werden die Aliquots lyophilisiert.

Diese Methode erfordert eine sorgfältige Anpassung der Trennbedingungen und kann auch relativ reine Zielmoleküle erhalten.