Das Grundprinzip der DNA-Synthese

Die chemische DNA-Synthese basiert auf der Festphasensynthesestrategie und der Phosphoramidit-Chemie.Anders als bei der biologischen DNA-Synthese ist das Material bei der chemischen DNA-Synthese DMT (4,4-Dimethoxytrityl) und Phosphoramidit-modifiziertes Desoxyriboxyside, wie in Abbildung 1 dargestellt. Die DNA-Synthese wird auf dem festen Träger durchgeführt (wir können verschiedene davon anbieten).Oligo-Synthesesäule), also CPG (Controlled Pore Glass) und PS (Polystyrol), und die gesamte Synthese wird auf a durchgeführtDNA/RNA-Synthesizer, unsere Hauptausrüstung, verfügt über verschiedene Modelle wie: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 usw., die Syntheserichtung reicht von 3' nach 5', und über eines wird ein Nukleotid in den festen Träger eingeführt Synthesezyklus.Ein typischer Synthesezyklus umfasst vier Schritte: Entschützung, Kopplung, Verkappung und Oxidation (Abbildung 2).Die Entschützung dient dazu, die DMT-Gruppe am festen Träger oder die 5'-Hydroxylgruppe am vorherigen Nukleosid zu entfernen. Als Entschützungsreagenz wird 3 % Trichloressigsäure in Dichlormethan verwendet.Dann ließ man das Phosphoramidit-modifizierte Desoxyriboxysid mit Hilfe eines Aktivators, d. h. 5-Ethylthiotetrazol oder 4,5-Dicyanimidazol, die Hydroxylgruppe freilegen, wodurch der Phosphitetriester (III) gebildet wurde, und der Kupplungsschritt wurde durchgeführt.Ein Capping-Schritt wird durchgeführt, um die nicht umgesetzte Hydroxylgruppe während des Kopplungsschritts zu blockieren und die Bildung unerwünschter Defektsequenzen zu minimieren.Schließlich wird der instabile Phosphitetriester (III) mit Jod als Oxidationsmittel in Gegenwart von Pyridin zum chemisch stabilen Phosphortriester (V) oxidiert.

Die synthetisierte DNA könnte durch Aminolyse vom festen Träger abgespalten werden, die 2-Cyanoethyl-geschützte Gruppe am Phosphortriester und das Amid an der Nukleobase werden gleichzeitig abgespalten, die Syntheseplatten und Synthesesäulen in Gestellen werden direkt in der Reaktionskammer platziert desEntschützungsausrüstung.Rohe DNA kann auf Anfrage durch HPLC, Elektrophorese und OPC hergestellt werden. Wir können Ihnen dies auch zur Verfügung stellenReinigungsausrüstungfür die Nachbearbeitung.